如何正确进行流动注射分析仪的校准

　　流动注射分析仪是一种基于连续流动体系的自动化分析技术，广泛应用于环境监测、临床检验、食品分析等领域。其核心优势在于高效、低耗且可重复性强，但测量的准确性高度依赖系统的校准。流动注射分析仪的校准方式。

　　一、校准的核心目的与原理

　　流动注射分析仪的校准旨在建立待测物浓度与检测信号(如吸光度、电位、荧光强度等)之间的定量关系，并消除仪器波动、基质干扰和操作误差对结果的影响。校准的核心是通过标准物质构建工作曲线(校准曲线)，利用已知浓度的标准溶液模拟实际样品的分析过程，从而修正仪器响应偏差。

　　流动注射分析仪的校准需考虑以下关键参数：

　　1. 流速稳定性：载流液流速直接影响反应时间与混合效率。

　　2. 进样体积精度：注射泵或阀的准确度决定样品分散程度。

　　3. 基线噪声与漂移：检测器的空白信号需通过校准扣除。

　　4. 化学干扰：复杂基质中的共存物质可能引起信号抑制或增强。

　　二、校准方法分类与操作流程

　　流动注射分析仪的校准方法可分为标准曲线法、内标法、标准加入法等，具体选择取决于分析目标和样品特性。

　　1. 标准曲线法(外标法)

　　这是流动注射分析仪常用的校准方式，适用于基质简单、干扰可控的样品。

　　- 步骤：

　　- 配制标准系列：制备5~8个已知浓度的标准溶液(覆盖待测物预期浓度范围)。

　　- 基线校正：以空白载流液(如去离子水或溶剂)运行系统，记录检测器基线信号，扣除背景噪声。

　　- 顺序进样：按浓度从低到高依次注入标准溶液，记录峰高或峰面积等信号值。

　　- 绘制校准曲线：以信号值为纵坐标、浓度为横坐标，拟合线性或非线性回归方程(如朗伯-比尔定律)。

　　- 样品测定：在相同条件下注入待测样品，通过校准曲线计算浓度。

　　- 关键点：

　　- 标准溶液需与样品基质匹配(如酸碱度、离子强度)。

　　- 流速、进样体积、反应温度等条件需严格一致。

　　- 定期检查标准曲线的线性范围(R²>0.99)及截距(应接近零)。

　　2. 内标法

　　当样品基质复杂或前处理易引入误差时，可加入内标物以补偿信号波动。

　　- 操作：在标准溶液和样品中均添加恒定浓度的内标物(如同位素标记物或化学性质相似的物质)，分别测定待测物与内标物的信号比值，以此建立校准曲线。

　　- 优势：可校正进样损失、流速波动及检测器灵敏度变化，但需确保内标物与待测物分离度良好且无相互作用。

　　3. 标准加入法

　　适用于样品量少或基质效应严重的场景。

　　- 步骤：取一定体积样品，依次加入不同量的标准溶液，直接测定信号增量，通过外推法计算样品原始浓度。

　　- 注意：需确保加入标准后总体积变化不影响流动注射分析仪的分散过程。

　　4. 多点校准与分段校正

　　对于非线性响应的检测器(如荧光猝灭、免疫分析)，需采用多点校准或分段拟合。例如，在高浓度区使用二次多项式拟合，低浓度区采用线性模型，以提高全量程准确性。

　　三、校准前的系统准备

　　1. 流路清洗：用空白载流液冲洗管路，排除气泡和残留污染物。

　　2. 基线稳定化：运行空白液至检测信号波动小于预设阈值(如±1%)。

　　3. 流速校准：通过计时或电子流量计验证蠕动泵转速与实际流速的一致性。

　　4. 进样系统校验：检查注射阀密封性及采样环体积精度(如20 μL环的误差应<0.5 μL)。

　　四、影响校准准确性的关键因素

　　1. 气泡与压力波动：管路中的气泡会改变流动阻力，导致流速瞬时变化，需通过预混合或脱气处理消除。

　　2. 交叉污染：高浓度样品残留可能导致低浓度样本信号偏高，需增加清洗周期或使用惰性涂层管路。

　　3. 温度效应：反应块温度波动会影响化学反应速率，需配备恒温装置(如Peltier控温模块)。

　　4. 检测器漂移：光源老化(如LED或氘灯)或光电元件灵敏度下降需通过频繁校准补偿。

　　5. 标准物质稳定性：标准溶液需现配现用或低温保存，避免挥发、沉淀或分解。

　　五、日常维护与定期校准

　　1. 日校准：开机后运行空白液和中等浓度标准液，验证基线及响应值是否在允许范围内。

　　2. 周校准：重新绘制标准曲线，检查线性范围及截距变化。

　　3. 月维护：清洗管路、更换耗材(如泵管、反应器)、检查电磁阀密封性。

　　4. 异常情况处理：若校准曲线斜率突变超过10%，需排查流路堵塞、检测器故障或标准物质失效。